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初搞色谱总会纠结在这个极性的问题上，事实上，对于是液相色谱分离来说，影响因素太多，远不只是一个极性问题的，虽然至今世界上也没有通用的理论来准确说明分离机理，但有两点因素是最影响分离的，第一个是物质与流动相的极性，第二个叫洗脱能力，这两点都很重要。
了解这两点，你上面的问题就解决了。虽然说极性与洗脱能力是相关的，但用洗脱能力来理解出峰快与慢以及分离效果，用极性来理解出峰顺序，这样就容易理解了。反相色谱一般使用强度因子来表示，一般极性参数大的，强度因子就小，但甲醇与乙腈比较特殊，极性参数甲醇与乙腈分别为5.1与5.8，强度因子却是甲醇3.0，乙腈3.2。所以说象你上面问的“如果流动相极性偏大，是不是分离效果不好？还有就是如果分离度不好，加大水的比例，延长保留时间，会不会影响到分离效果？”可以这样理解，流动相洗脱能力越强分离越不好。而对于反相色谱来说，只有两相，一相是有机相，而另一相是水相。有机相是强洗脱剂，水是弱洗脱剂。当然有机相中的洗脱能力也是有差别的，按THF，ACN，MEOH顺序。而不要用极性去理解，那样太复杂了。
有机相比例越大，洗脱能力越强，水相比例越大，洗脱能力越弱，但越容易分离。
看下表：
甲醇/水 乙腈/水 四氢呋喃/水
10 相当于 6 相当于 4
20 12 10
30 22 17
40 32 23
50 40 30
60 50 37
70 60 45
80 73 53
90 86 63
100 100 72
高效液相色谱的术语和定义如下：
术语：
色谱图，样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号是时间曲线，又称色谱流出曲线。漂移，基线随时间的缓缓变化。主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。峰面积，峰与峰底所包围的面积。
分离度（resolution，R)，相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值。也叫分辨率，表示相邻两峰的分离程度。R≥1.5称为完全分离。理论塔板数（theoretical plate number，N)，用于定量表示色谱柱的分离效率（简称柱效）。峰底，基线上峰的起点至终点的距离。
定义：
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography\HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等，其统称来说即为高柱效、高压力、高效率的液相色谱。
高效液相色谱的分离原理：
1、液固
流动相为液体，固定相为吸附剂（如硅胶、氧化铝等）。这是根据物质吸附作用的不同来进行分离的。其作用机制是：当试样进入色谱柱时，溶质分子（X）和溶剂分子（S）对吸附剂表面活性中心发生竞争吸附（未进样时，所有的吸附剂活性中心吸附的是S）。
2、离子对
离子对色谱法是将一种（或多种）与溶质分子电荷相反的离子（称为对离子或反离子）加到流动相或固定相中，使其与溶质离子结合形成疏水型离子对化合物，从而控制溶质离子的保留行为。其原理可用下式表示：X水相Y-水相===X Y-有机相。
式中：X水相是流动相中待分离的有机离子；Y水相是流动相中带相反电荷的离子对；X Y是形成的离子对化合物。离子对色谱法解决了以往难以分离的混合物的分离问题，诸如酸、碱和离子、非离子混合物，特别是一些生化试样如核酸、核苷、生物碱以及药物等分离。
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评论列表（3条）
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